加強型生物安全二級實驗室是指在普通型生物安全二級實驗室的基礎上，設置緩沖間、機械通風系統、排風高效過濾等且有明確負壓或壓力梯度要求的實驗室，之前被稱為負壓BSL-2實驗室或P2+實驗室。2017版《病原微生物實驗室生物安全通用準則》中將其定義為加強型生物安全二級實驗室。加強型BSL-2實驗室在普通型BSL-2實驗室的基礎上增加了負壓（實驗室內相對于外部為負壓），實驗室內的氣流定向流動（從相對清潔區流向相對污染區），實驗室內被污染的空氣經過高效過濾后及時排出，防止實驗室內可能存在的生物污染外溢，確保實驗室周圍環境的安全。
近年來結核病相關標本檢測數量和種類增加，醫院檢驗科和第三方實驗室可選擇建造加強型BSL-2實驗室專門用于結核桿菌的檢測。此外，某些大型醫院檢驗科可能會檢測一些病因不明或突發未知的呼吸道傳播疾病的微生物標本，如目前流行的新型冠狀病毒，為了提高實驗室安全系數，防止這些病原微生物氣溶膠外溢且保證合理的建設費用，可選擇建造加強型BSL-2實驗室。2020年2月發布的《醫學生物安全二級實驗室建筑技術標準》把用于醫學領域的加強型BSL-2實驗室稱作加強型醫學BSL-2實驗室，并將該類實驗室作為重要的一類進行闡述。SICOLAB將對此類實驗室設計的難點做進一步解釋。
一、實驗室平面布局
加強型醫學BSL-2實驗室的位置應盡量選擇在整個微生物實驗室的一端，遠離其他非微生物實驗室，要利于送風和排風，排風管道越短越好。加強型醫學BSL-2實驗室設計的總體要求是：平面布局合理，潔凈分區明確，避免交叉污染，人流組織、物流組織、氣流組織等符合生物安全方面的要求。
（一）實驗室建設分區
加強型醫學BSL-2實驗室應包含核心工作間和緩沖間，緩沖間可兼作防護服更換間，建設單位也可單獨設置防護服更換間，必要時可設置標本處理間和洗消間。本文將按照設置核心工作間、緩沖間和防護服更換間模式進行介紹。
1、核心工作間
核心工作間應易于實驗設備的布置和實驗活動的進行，為減少氣流死角和渦流，其平面結構應盡量規整（以長方形為主）；考慮到對氣流的影響，核心工作間存放的儀器設備應盡量少，面積不宜過大。
核心工作間的門朝向緩沖間的方向開啟，門上應設置密封觀察窗，便于外界隨時了解情況。門的定位應避免核心工作間排風口一側（室內排風口的設置應便于排風設備的安裝，所以排風口的位置相對固定），不能在排風口的同側或靠近排風口的左右兩側。
雙門傳遞窗的位置須遠離室內的定向氣流，應該在核心工作間送風口的后面或后側面，雙門傳遞窗的旁邊可設一個工作臺。
如果實驗室要使用水池，可在工作臺旁設置，實驗室防護區的給水管道應設置倒流防止器或其他防止回流污染的裝置，并且這些裝置應在輔助工作區。實驗室工作區應配備洗眼裝置。
核心工作間不應設置開戶外窗，如要設置，可在內墻上設置閉觀察窗，觀察窗應采用安全的材料制作。
核心工作間應配置壓力蒸汽滅菌器以及其他適用的消毒設備，含有可經空氣傳播的病原微生物的危險性較高的污染物要經過高壓滅菌后再運送出實驗室。加強型BSL-2實驗室可單獨設置洗消間，也可和其他微生物實驗室共用洗消間，洗消間不宜設在遠離核心工作間的位置，最好與核心工作間鄰近并通過雙門傳遞窗相連。
2、緩沖間
為避免核心工作間與相對清潔區域的空氣交換，保證負壓的穩定，應在核心工作間出口外側設置緩沖間。緩沖間內側門即核心工作間的門，緩沖間外側開口的門向外開啟并設置密封觀察窗。緩沖間的門宜能互鎖，如果使用互鎖門，應在互鎖門的附近設置緊急手動解除互鎖開關。緩沖間越大，緩沖間與相鄰區域之間的空氣交換量就越大，因而會減弱緩沖作用，緩沖間在滿足正常人流、物流的情況下，盡量縮小緩沖尺度。加強型BSL-2實驗室緩沖間面積不宜超過核心工作間的1/8。
3、防護服更換間
可根據整體布局和使用人數合理設置防護服更換間。防護服更換間內側開口連接緩沖間，外側開口可朝向走道也可朝向其他相對清潔的房間。因為防護服更換間應為微正壓，所以其外側開口的門應向內開啟。
實驗室應設洗手池，水嘴開關應為非手動式，如感應式、肘開式等。工作人員在離開實驗室前要洗手，所以洗手池宜設于防護服更換間內或鄰近防護服更換間出口處。
（二）實驗室人流組織和物流組織
工作人員進入路線為：防護服更換間→緩沖間→核心工作間。
工作人員離開線路為：核心工作間→緩沖間→防護服更換間。
清潔物品進入路線可工作人員進入路線。
檢驗標本進入路線為：核心工作間的雙門傳遞窗→核心工作間。
污染物離開路線為：核心工作間→核心工作間的雙門傳遞窗→洗消間，或者：核心工作間→核心工作間的雙門傳遞窗→非清潔通道→洗消間。
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