一、轉基因產品檢測的工作流程SICOLAB
轉基因產品檢測的工作流程為:實驗室樣品到樣驗收(確定是否具備檢驗的基本條件)→混樣→獲取測試樣品→測試樣品的制備(待檢狀態)→核酸和(或)蛋白等目標物質的提取→PCR實驗(包括擴增和產物分析)和(或)蛋白質檢測→結果判定→結果表述,出具檢驗報告。
二、實驗室測試樣品的要求SICOLAB
轉基因產品檢測所接收的待檢樣品應置于原始包裝袋(或容器)中,不能接收從其他檢測、檢驗等分出來的樣品,以避免樣品間交叉污染。
三、實驗室設施和環境要求SICOLAB
1、用于轉基因產品檢測實驗室的設施和壞境要求應符合G5/T15481-2000的規定。
2、用于核酸檢驗的轉因產品檢測實驗室,有條件的宜在所分隔的各工作區域設置緩沖間,緩沖間的壓力為負壓(或上設抽風裝置),與其工作相連的工作間為正壓,工作間與緩沖間之間宜安裝磁性連鎖裝置。受實驗場所限制而無條件設置緩沖間的實驗室,在對檢測區域進行功能劃分后,應根據本文第四條屮的規定設置實驗室的壓力。非實驗人員不應進入各實驗工區。
3、不同功能的核酸檢驗工作區應是分隔獨立的工作室,并有明顯的標志,各區間不能直通。各區之間如果是緊密相連,需安裝物品傳遞艙。
4、每個工作區域的頂部應安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm,安裝數量為每20m2安裝一支40W的紫外燈,燈與地面的距離不宜超過2.0m±0.1m
四、實驗室工作順序SICOLAB
所有實驗操作應在規定的區域進行,待檢樣品的流動應遵照轉基因產品檢測工作流程的順序,嚴格按單一方向進行。
五、實驗室功能間內容SICOLAB
(一)核酸檢驗區
1、試劑貯存和準備區
a)主要功能:原裝試劑和配制試劑的貯存,所有試劑的配制與分裝。
b)工作區域的壓力要求:未設緩沖間的試劑貯存和準備區,工作區域為正壓。
c)注意事項:當試劑經質檢合格后,應將其分裝貯存備用,貯存試劑的分裝體積根據通常在實驗室內一次測定所需的擴增反應數決定。用于擴增的試劑應冰凍貯存。
2、樣品制備區
a)主要功能:實驗室樣品的混樣和測試樣品的制備。
b)工作區域的壓力要求:未設緩沖間的樣品制備區,工作區域為負壓或減壓,可安裝排風系統。
c)注意事項:此區應遠離其他實驗操作區;粉碎樣品時的器皿應單獨使用,所用的器具在使用前經過徹底清洗并高壓消毒,防止交叉污染;稱取的測試樣品應加蓋后再移至樣品核酸制。
3、核酸制備區
a)主要功能:核酸的提取純化與貯存;核酸含量的測定;測試樣品DNA的保存。
b)工作區域的壓力要求:未設緩沖間的核酸制備區,工作區域為負壓或減壓,可安裝排風系統。
c)注意事項:已純化的核酸應保存于-20℃或-80℃,避免反復凍融;陽性和陰性標準物質DNA可調整至常用的使用濃度后分裝并冷凍保存。
4、擴增區
a)主要功能:PCR擴增反應體系的配制和模板的加入,核酸擴增。
b)工作區域的壓力要求:未設緩沖間的擴增區,工作區域為負壓或減壓,可安裝排風系統
c)注意事項:嚴格限制無關人員出入并減少在本區內走動;加樣應在超凈工作臺(生物安全柜)內進行,超凈工作臺的氣流方向宜選擇垂流式;巢式PCR的第二次加樣必須在此區進行。
5、擴增產物分析區
a)主要功能:擴增產物的測定。
b)工作區域的壓力要求:未設緩沖問的擴增產物區,工作區域為負壓或減壓,應安裝排風系統。
c)注意事項:此區是最主要的擴增產物污染來源,應遠離其他實驗操作區;使用 PCR-ELISA方法檢測擴增產物時,應使用洗板機洗板。
注:若實驗僅采用全自動擴增檢測儀(如實時熒光定量PCR儀),可將擴增區與擴增產物分析區合并為一個區。
(二)蛋白質檢驗區
1、蛋白質分離純化區
本工作區域的功能是用于蛋白質的分離與純化。蛋白質純化應具備低溫工作的場地,如4℃冷房和(或)層析柜等。
2、蛋白質檢測區
本,作區域的功能是蛋白質分析檢測。
3、其他區域
可設置洗滌消毒空【洗滌、消毒、制備純水或雙蒸水、制冰等】、高速/超高速離心機室、低溫/超低溫冰箱室等。
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